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NADK（EC 2.7.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。

NADK催化NAD⁺磷酸化，生成NADP⁺；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH；在340nm下测定NADPH增加速率。可反映出NADK活性的大小。

• 细菌或培养细胞样品：
  先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量(10⁴个)∶提取液体积(mL)＝500～1000∶1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
  
• 组织样品：按照组织质量(g)∶提取液体积(mL)＝1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
  
• 血清(浆)样品：直接检测。

• 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
  
• 将试剂一和试剂二37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min以上。
  
• 工作液配制：
  
  • 工作液I：在试剂三中加入5mL试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
    
  • 工作液II：在试剂四中加入18mL试剂二，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
• 按下表加入相应成分：
  

  成分(μL)	测定孔	对照管
  样本	20	20
  工作液I	80
  试剂一		80

• 充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min，立即煮沸2min（盖紧，防止水分散失）冰浴冷却，10000g，25℃离心10min，取上清。
  
• 按下表继续加入相应成分：
  

  成分(μL)	测定孔	对照管
  上清液	40	40
  工作液II	160	160

• 加完试剂混匀，室温静置15min，340nm下测定吸光值，ΔA＝A_测定－A_对照。

• 用微量石英比色皿测
  
  • 血清(浆)样品：
    单位的定义：每毫升血清(浆)每分钟生成1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
    NADK(nmol/min/mL)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷V_样÷T＝53.59×ΔA
    
  • 组织、细菌或细胞样品：
    
    • 按样本蛋白浓度计算：
      单位的定义：每毫克组织蛋白每分钟生成1nmol NADP定义为一个酶活力单位。
      NADK(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V_样×Cpr)÷T＝53.59×ΔA÷Cpr
      
    • 按样本鲜重计算：
      单位的定义：每克组织每分钟生成1nmol NADP定义为一个酶活力单位。
      NADK(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V_样÷V_样总)÷T＝53.59×ΔA÷W
      
    • 按细菌或细胞密度计算：
      单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol NADP定义为一个酶活力单位。
      NADK(nmol/min/10⁴ cell)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V_样÷V_样总)÷T＝0.107×ΔA
    • V_反总：反应体系总体积，1×10^-4L；
      
    • ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；
      
    • d：比色皿光径，1cm；
      
    • V_样：加入样本体积，0.02mL；
      
    • V_样总：加入提取液体积，1mL；
      
    • T：反应时间，15min；
      
    • Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
      
    • W：样本质量，g；
      
    • 500：细菌或细胞总数，500万。
• 用96孔板测定
  
  • 血清(浆)样品：
    单位的定义：每毫升血清(浆)每分钟生成1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
    NADK(nmol/min/mL)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷V_样÷T＝107.18×ΔA
    
  • 组织、细菌或细胞样品：
    
    • 按样本蛋白浓度计算：
      单位的定义：每毫克组织蛋白每分钟生成1nmol NADP定义为一个酶活力单位。
      NADK(nmol/min/mg prot)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V_样×Cpr)÷T＝107.18×ΔA÷Cpr
      
    • 按样本鲜重计算：
      单位的定义：每克组织每分钟生成1nmol NADP定义为一个酶活力单位。
      NADK(nmol/min/g鲜重)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W×V_样÷V_样总)÷T＝107.18×ΔA÷W
      
    • 按细菌或细胞密度计算：
      单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol NADP定义为一个酶活力单位。
      NADK(nmol/min/10⁴ cell)＝[ΔA×V_反总÷(ε×d)×10⁹]÷(500×V_样÷V_样总)÷T＝0.214×ΔA
    • V_反总：反应体系总体积，1×10^-4L；
      
    • ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；
      
    • d：96孔板光径，1cm；
      
    • V_样：加入样本体积，0.02mL；
      
    • V_样总：加入提取液体积，1mL；
      
    • T：反应时间，15min；
      
    • Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
      
    • W：样本质量，g；
      
    • 500：细菌或细胞总数，500万。